Развивался как: На связи – Коммерсантъ Нижний Новгород

На связи – Коммерсантъ Нижний Новгород

Фото:
Роман Яровицын
/
Коммерсантъ

На связи

29.07.2021, 0:00

Приокский район города — самый маленький по площади, но при этом самый зеленый, считается центром радиоэлектронной промышленности города. С разработками и созданием средств связи и радиолокации, элементной базы микроэлектроники связано большинство крупных предприятий района.

Приокский район считается самым маленьким в составе Нижнего Новгорода как по площади территории, так и по численности населения. По данным городской администрации, в нем живут около 104 тыс. человек.

Район был образован в 1935 году, когда при реорганизации города Горького было создано шесть районов вместо ранее существовавших четырех. Сначала он назывался Мызинским. Считается, что первое название району дали по местечку Мыза — исторической части возле московско-арзамасского тракта. На прибалтийский манер «мызой» в конце 19 века называлось загородное имение председателя Нижегородского уголовного суда Карла Ребиндера. Однако уже в 1936 году по решению Горьковского крайисполкома район был переименован в Ворошиловский в честь советского маршала и наркома обороны СССР Климента Ворошилова. Свое современное название Приокский район получил в 1956 году.

Однако промышленность в районе появилась задолго до его официального создания. Летом 1915 года из Риги было эвакуировано акционерное общество «Сименс и Гальске» и на высоком берегу Оки заложен завод по производству радиотелеграфных и телефонных аппаратов для воюющей в Первой мировой войне русской армии. В начале 1917 года завод «Сименс и Гальске» заработал, вокруг него образовались дома для рабочих, баня, лавка, пекарня. Считается, что это была основа будущего Приокского района, который до тех пор представлял из себя конгломерат множества поселков: Старого, Нового, Барачного, Дачного, Толмачевки, Александровки, Дубенок и Тобольских казарм, выстроенных в царское время за чертой города для пехотного полка (сейчас это часть Советского района города).

Своим современным обликом Приокский район во многом обязан науке и промышленности, а также бизнесу

Предприятие росло и развивалось, оно носило имена Горьковского завода №197 им. Ленина и телевизионного завода им. Ленина. Сейчас это ПАО «Нител», выпускающее радиолокационные станции.

Весь Приокский район развивался как центр радиоэлектронной промышленности. С разработками и созданием средств связи и радиолокации, элементной базы микроэлектроники связано большинство крупных предприятий района. Это НИИ измерительных систем им. Ю. Е Седакова, Нижегородский научно-исследовательский институт радиотехники, Нижегородское научно-производственное объединение им. М. В. Фрунзе, НПП «Салют» и другие.

В советские годы развитие жилищно-социальной инфраструктуры района было связано именно с предприятиями. Их строительные подразделения возводили жилье, особенно в бурный период панельного домостроительства 1980-х годов. Заводы и НИИ строили свои детские сады, клубы, содержали загородные турбазы, пионерские лагеря, даже собственные совхозы и фермы. С распадом СССР и переходом к рыночной экономике большая часть активов приокских предприятий в социальной сфере была передана муниципалитету.

Тем не менее своим современным обликом Приокский район во многом обязан науке и промышленности, а также бизнесу, который построил в районе жилые комплексы «Горная лаванда», «Победа», «Цветы», «Гагаринские высоты» и другие. Сегодня к Приокскому району также относятся близлежащие деревни: Ольгино, Бешенцево, Мордвинцево, Ближнее Константиново, Ляхово, поселок Луч. В 2019 году в состав Нижнего Новгорода вошел Новинский сельсовет, увеличив площадь города примерно на 10%, а его население на 12 тыс. человек. Формально Новинки не относятся к Приокскому району, числясь отдельным административно-территориальным образованием. Однако район на правах соседа и старшего брата помогает сельсовету в решении многих вопросов.

Кроме того, самый маленький район Нижнего Новгорода считается одним из наиболее экологически благополучных. В его черте расположены парк «Швейцария», урочище Слуда и заповедная территория Щелоковского хутора с озерами, частично относящаяся и к соседнему Советскому району.

Роман Кряжев

Читать далее приложение «Нижний Новгород. Бизнес-800»

Главные новости от «Ъ-Приволжье»

Итоги 2020: как развивалась пандемия коронавируса в России в графиках

• Сергей Козловский
• Би-би-си

24 декабря 2020

Автор фото, Valery Sharifulin/TASS

В апреле-октябре в регионах, где смертность от всех причин во время пандемии оказалась выше средней, умерли на 105 тысяч человек больше, чем обычно. Больше всего смертность выросла в северокавказских регионах, например, в Чечне и Дагестане, а также в крупнейших городах Москве и Санкт-Петербурге.

Русская служба Би-би-си проанализировала данные Росстата о смертности в регионах России. Последняя статистика доступна по состоянию на октябрь этого года.

Октябрь оказался худшим месяцем с начала пандемии в плане смертности: в этом месяце в России было зарегистрировано на 30% больше смертей, чем за аналогичный период годом ранее. В октябре смертность выросла во всех регионах, кроме Республики Алтай и Забайкальского края.

Если сравнивать смертность в отдельно взятом месяце 2020 года со средней смертностью за последние 15 лет в этом же месяце, то октябрь тоже оказался худшим — показатель вырос на 23%, подсчитала Би-би-си. В сентябре рост составил 11%, в июле — 12%, в мае и июне — по 3%, а в апреле и августе смертность по всей России немного снизилась по сравнению со средней за 15 лет.

Такое сравнение позволяет подсчитать избыточную смертность, которая показывает, насколько больше людей умерло в конкретном месяце по сравнению со средней смертностью. Этот показатель, который учитывает умерших от всех причин, обычно используется вместе с официальным данными по смертности непосредственно от коронавируса. Избыточная смертность помогает понять, как в целом повлияла пандемия на систему здравоохранения.

Если посмотреть на данные по отдельным регионам, то самый большой относительный прирост смертности зарегистрирован в Чечне. В этом регионе в июле смертность выросла на 79%, а в августе — на 86%. Также в числе «анти-лидеров» оказались еще два северокавказских региона — Дагестан и Ингушетия. Замыкают пятерку крупнейшие города — Москва и Санкт-Петербург.

В мае, на который пришелся пик первой волны Covid-19 в России, только 25 регионов показали избыточную смертность. В октябре прирост смертности был зарегистрирован в 71 регионе.

Вторая волна

Во время первой волны Covid-19 карантин по всей России официально не вводился, но с начала апреля и до 12 мая действовал режим нерабочих дней, а также были закрыты многие компании из сферы услуг и непродуктовой торговли. Дополнительные ограничительные меры вводили местные власти в конкретных регионах.

В первую волну одни из самых жестких ограничений были введены в Москве: власти ввели систему цифровых пропусков, которые нужно было получать для передвижения по городу.

При этом после окончания «нерабочих дней» регионы сами должны были определиться, какие меры будут действовать дальше. В итоге, если в Москве отчетливо виден пик заболеваемости весной, после которого произошло существенное падение, то в остальных регионах летом произошло лишь небольшое снижение.

Осенью заболеваемость снова начала расти — как в Москве, так и в субъектах. Региональные власти начали вводить различные ограничительные меры.

Во всем мире и в России в том числе СМИ начали писать о второй волне коронавируса. Однако в России о второй волне можно говорить только в отношении Москвы, отмечал в эфире «Эха Москвы» независимый демограф Алексей Ракша. Поскольку в регионах существенного снижения не произошло, то там еще идет первая волна, говорил он.

«Регионы вспыхивают и затухают совершенно в разное время, асинхронно. Более того, внутри одного и того же региона разные города заболевают и выздоравливают в разное время. Из-за этого пандемия у нас в России растянута во времени, пространстве и фактически идет один напекающийся эпидемиологический процесс. Где-то он идет более негативно, где-то — более позитивно. Но ни о какой второй волне в целом по стране речь не идет», — говорил Ракша.

Об этом же в октябре говорил президент Владимир Путин. Он сказал, что в России не говорят о второй волне Covid-19, потому что во многих регионах еще не закончилась первая.

Если весной максимальное число новых случаев Covid-19 в сутки не превышало 12 тысяч, то во время второй волны этот показатель несколько раз приближался к отметке в 30 тысяч.

Суточная смертность от коронавируса тоже существенно выше, чем весной. В декабре показатель два раза превышал отметку в 600 смертей.

Covid ушел в регионы

Основной удар эпидемии осенью пришелся на регионы, отмечал пресс-секретарь президента Дмитрий Песков. «Она ушла на восток от Москвы», — говорил он.

В Москве осенью количество новых случае побило майский рекорд, однако число госпитализаций по состоянию на конец декабря не превышало 2 тыс. При этом жесткий карантин, как весной, в городе не вводился.

Из крупных регионов наиболее сложная ситуация наблюдается в Санкт-Петербурге, заявлял 1 декабря министр здравоохранения Михаил Мурашко.

К концу ноября количество новых случаев Covid-19 в Петербурге выросло до 3,7 тыс. в сутки и остановилось на этом уровне. С 25 ноября власти публикуют суточные данные, которые варьируются в пределах 3,6-3,7 тыс. новых случаев.

При этом на сайте городской администрации публикуется статистика межведомственного координационного совета по противодействию Covid-19. В этой статистике данные по новым случаям отличаются от сведений, которые включаются в федеральную статистику. По «альтернативным» данным, суточное количество новых заражений коронавирусом в Петербурге 10 декабря превысило 5 тыс. Расхождения в данных объясняются разными методологиями их сбора.

Власти Петербурга не публикуют ежедневные данные о госпитализациях. Публикуется лишь количество человек «под медицинским наблюдением» (изначально категория называлась «на карантине»). В этот показатель входят в том числе люди, находящиеся на самоизоляции. В последние три недели этот показатель падает.

В то же время, по данным межведомственного совета, с конца сентября по конец декабря количество госпитализаций выросло с 200 до 1000 в сутки. 20 декабря в городе были заняты почти все 10,5 тыс. коек, выделенные для больных коронавирусом.

В других регионах также напряженная ситуация со свободными местами в больницах. Кроме этого пациенты жалуются на дефицит лекарств, врачи — на нехватку медицинского персонала и оборудования.

Власти надеются, что ситуация изменится к лучшему после вакцинации. О начале «масштабной вакцинации» Путин объявил 2 декабря. Всего планируется привить около 60% взрослого населения страны, заявлял глава минздрава Мурашко. Эпидемия в России может закончиться весной 2021 года, расчитывает глава Роспотребнадзора Анна Попова.

При участии Олеси Волковой

Абрамян о переходе Закарина: главное, чтобы он развивался как велогонщик

https://rsport.ria.ru/20190809/1557353414.html

Абрамян о переходе Закарина: главное, чтобы он развивался как велогонщик

Абрамян о переходе Закарина: главное, чтобы он развивался как велогонщик — РИА НОВОСТИ Спорт, 09.08.2019

Абрамян о переходе Закарина: главное, чтобы он развивался как велогонщик

Главный тренер сборной России по велоспорту на шоссе Иракли Абрамян считает, что решение российского велогонщика Ильнура Закарина перейти в команду ССС нужно… РИА НОВОСТИ Спорт, 09.08.2019

2019-08-09T16:25

2019-08-09T16:25

2019-08-09T16:25

иракли абрамян

велоспорт

ильнур закарин

/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content

/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content

https://cdn25.img.ria.ru/images/rsport/112787/54/1127875479_0:120:3301:1977_1920x0_80_0_0_9f5c1500c82f31d63643a98df9e5f0e5.jpg

МОСКВА, 9 авг — РИА Новости, Вероника Гибадиева. Главный тренер сборной России по велоспорту на шоссе Иракли Абрамян считает, что решение российского велогонщика Ильнура Закарина перейти в команду ССС нужно воспринимать позитивно с точки зрения возможности его развития как гонщика.Закарин уходит из Katusha-Alpecin, в составе которой стал призером общего зачета «Вуэльты»-2017, одержал победы на этапах Гранд-туров «Тур де Франс» и «Джиро д’Италия». С 2020 года гонщик начинает выступать за польскую ССС.

РИА НОВОСТИ Спорт

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

2019

РИА НОВОСТИ Спорт

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Новости

ru-RU

https://rsport.ria.ru/docs/about/copyright.html

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/

РИА НОВОСТИ Спорт

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

https://cdn24.img.ria.ru/images/rsport/112787/54/1127875479_286:0:3017:2048_1920x0_80_0_0_fad6be135ddd41c589a1f72d249a9724.jpg

РИА НОВОСТИ Спорт

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

РИА НОВОСТИ Спорт

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

иракли абрамян, велоспорт, ильнур закарин

Как менялся и развивался семейный центр «Западное Дегунино»

Сейчас мы уже не можем представить свою жизнь без социальной защиты населения. Ведь это те люди, которые готовы прийти на помощь в любой ситуации, им небезразлична судьба окружающих — смелые, яркие, умеющие сопереживать профессионалы своего дела. О том, как менялся семейный центр «Западное Дегунино», расскажут те, кто начинал развивать социальную сферу практически с нуля.

Помогать и поддерживать

«Я начинала свою работу в отделении социальной диагностики. Помню, как в самом начале удивлялась и одновременно восхищалась семьями, воспитывающими пятерых, семерых детей. „Как же они справляются“, — постоянно думала я. Хотелось помочь сразу всем, дать им понять, что мы их поддерживаем. Сначала мы предоставляли продуктовые наборы, спонсорские товары, благотворительные наборы, канцтовары для школы. Затем появились баллы, на которые нуждающиеся семьи смогли приобрести одежду, продукты и товары длительного пользования. Считаю это достойным решением, поскольку семья получает полноценную поддержку для улучшения качества жизни. Работаю в социальной защите уже 15 лет, но до сих пор испытываю какое-то трепетное чувство, когда удалось помочь новой семье», — рассказывает специалист Наталья Савкина.

Семейный центр «Западное Дегунино» стремится улучшить жизнь семей, которые в него обращаются. Каждый сотрудник заинтересован в том, чтобы помогать людям и делать их счастливее.

Дети — мое призвание

Ежедневно детский смех слышится в стенах центра — это своеобразная благодарность труду специалиста по социальной работе, ведь если счастливы дети, то работа не прошла даром. Задача сотрудников — не только помочь ребятам социализироваться, но и подарить им беззаботное детство.

«Сейчас я заведующая отделением дневного пребывания детей и подростков. А пришла простым специалистом по социальной работе с самого начала существования нашего центра. Я сразу поняла, что хочу работать именно с детьми, потому что от них получаешь колоссальный эмоциональный заряд, стопроцентную отдачу, они наполняют энергией добра. Мы с коллегами сами придумывали мероприятия, были в движении все время, приходили домой уставшими, но с улыбкой — потому что целый день нас окружал смех ребят и море позитива. Сейчас к проекту подключились городские организации: музеи и театры открывают свои двери для ребят, аниматоры дарят им настоящий праздник, а мы помогаем эффективно и грамотно пройти процесс социализации и стать полноценной личностью», — делится воспоминаниями Елена Гуляева.

Креативный подход — наша визитная карточка

Социальная работа — профессия многозадачности и оперативности. В своей работе центр избирает гибкую позицию — это умение подстроиться под запросы семей, разнообразить перечень предоставляемых услуг и, конечно же, творчески подходить к выполняемым функциям. «В социальную защиту я пришла, следуя примеру своей мамы. За время работы в нашем центре я разработала множество проектов и активностей для населения. Считаю, что самое важное для нас — не останавливаться на достигнутом и двигаться только вперед», — делится опытом заместитель директора Алёна Пачеко Рейнага.

Центр работает с семьями, имеющими детей разных возрастов, и успешно находит подход к каждому ребенку. Помощь здесь может найти каждый человек. «За последние два года мы развили сферу подростковой деятельности, в наших стенах появился клуб „Skill Club“ для ребят от 14 до 17 лет. Проект успешно набирает обороты: мы участвуем в городских активностях, проводим брифинги и мастер-классы, у нас уже сформировался свой клубный актив», — рассказывает заместитель директора.

Моя цель — сохранить семьи

Семья — самое важное и дорогое в нашей жизни. Любой ребенок нуждается как в папе, так и в маме. Поэтому в семейном центре «Западное Дегунино» считают, что первостепенная миссия — спасти семью от разрушения. И для достижения этой цели сотрудники показывают весь свой профессионализм, приходя на помощь в любой ситуации.

«10 лет назад я нашла свое призвание — специалист по социальной работе. Я тружусь в отделении ранней профилактики семейного неблагополучия, спасаю семьи от внутренних разломов. Каждый из нас может оступиться на своем жизненном пути — в этот момент важно протянуть руку помощи. Не бывает плохих детей или родителей, бывают те, которым не хватает знаний, умения любить, навыка создания и сохранения семьи, и для таких людей существуем мы, готовые всегда поддержать. За время своей работы я видела, как люди способны меняться, перерождаться, видела слезы радости, врачевала души, заново учила взаимодействовать с окружающими и доверять», — вспоминает Марина Пирогова.

Психологическая помощь — это не страшно

Психологический аспект в семейных центрах города Москвы не стоит на месте, он стремительно развивается и модернизируется под временные требования. Сейчас мы активно расширяем перечень оказываемых услуг: например, людям стала доступна семейная медиация, которая помогает решить конфликт на досудебном этапе.

«Я работаю психологом в центре 12 лет. За время своей профессиональной деятельности я сталкивалась с различными семейными проблемами, работала как с детьми, так и с родителями. Каждый раз при удачном разрешении острых вопросов я испытываю невероятную радость от того, что стала тем жизненным проводником, который смог наладить судьбу еще одного человека. Помню, как на раннем этапе существования центра люди стеснялись обращаться к психологу, не могли раскрыться и довериться чужому человеку. Я приложила максимум усилий для того, чтобы семьи смогли понять, что помощь психолога — это не приговор, это лишь шаг на пути к улучшению своей жизни. И сейчас я чувствую благодарность по отношению к тем людям, которые не боятся говорить о своих проблемах. Спасибо, что даете возможность вам помочь», — комментирует психолог Елена Мартынова.

Нам 20 лет

Семейные центры — место поддержки для многих семей. На протяжении 20 лет люди спешат в стены центра, потому что знают, что здесь их ждет профессиональная помощь и радушный прием.

«В центр я пришла работать 15 лет назад на должность специалиста по социальной работе. За эти годы наше учреждение достигло больших результатов. Сейчас я являюсь руководителем, и в скором времени центр будет отмечать юбилей — 20 лет с момента открытия. Для нас это значимая дата, поскольку за этот период мы усовершенствовали подход к работе с населением и разработали ряд проектов, улучшающих качество жизни людей.

Основная задача центра — понять, что необходимо семье, оказать профессиональную поддержку, которая поможет наполнить ее жизнь позитивом, преодолеть кризисы, сформировать успешную личность и подарить детям счастливое детство.

Я хочу искренне поздравить всех сотрудников социальных служб с 30-летием социальной защиты населения — это достойный труд, который будет лишь совершенствоваться и развиваться с каждым годом. Мы рады видеть любого в стенах нашего центра, готовы помочь каждому в решении проблем», — рассказывает директор семейного центра «Западное Дегунино» Наталья Русавская.

Социальная защита населения — гибкая система, которая умеет и может подстраиваться под требования общества. В частности, во время пандемии COVID-19 центр экстренно перенес свою работу в онлайн-формат, откорректировав и улучшив ее. Благодаря семейным центрам города Москвы люди всегда могут рассчитывать на незамедлительную профессиональную помощь.

Источник

Пресс-служба Департамента труда и социальной защиты населения города Москвы

Мать Ларина рассказала, что в семье тхэквондиста всегда верили в его победу на Олимпиаде — Спорт

ПЕТРОЗАВОДСК, 28 июля. /ТАСС/. Семья олимпийского чемпиона Владислава Ларина на протяжении всей спортивной карьеры тхэквондиста верила в его победу на Играх. Об этом ТАСС рассказала мать спортсмена Ольга Ларина.

Во вторник на Олимпиаде в Токио Ларин одержал победу в финале над представителем Северной Македонии Деяном Георгиевски в весовой категории свыше 80 кг. «К этой побелей мы готовились 17 лет, с того момента, как Влад начал заниматься тхэквондо в первом классе. Я понимала, что мой ребенок должен достичь каких-то результатов. Не все сразу должно было свершиться, нужно было пройти этапы чемпионата Европы, чемпионата мира, российские турниры, но олимпийского золота мы ждали в любом случае», — рассказала она.

По словам Лариной, тренер ее сына Сергей Петров сразу заметил способности ребенка, его растяжку и навыки, которые он за два года до прихода в секцию единоборств получил на тренировках по спортивной гимнастике. «Влад сломал локоть, что не позволило продолжить занятия в этом направлении. Когда Петров увидел, что он садится на все шпагаты, отжимается, подтягивается, делает мосты — гимнастика его подготовила за два года очень хорошо — сразу сказал, что забирает ребенка: его руки не важны, самое главное — это растяжка. С того момента Влад пошел заниматься в тхэквондо, это было пальцем в небо: я понятия не имела об этом виде спорта, никаких рекомендаций не было», — рассказала собеседница агентства.

Ларина отметила, что в течение 17 лет семья создавала все условия, чтобы ее сын развивался как спортсмен и человек. От будущего олимпийского чемпиона требовалось учиться в школе без троек. По словам матери спортсмена, теперь Ларин свободно может разговаривать, давать интервью на английском языке. Понимает он и французский язык, который также изучал. До тех пор, пока Владислав не вошел в сборную России по тхэквондо, родители покупали все необходимое для занятий, искали спонсоров для поездок на выездные соревнования.

«В районах на тот момент у нас тхэквондо не было, только в Петрозаводске, потому требовались выезды, практика, чтобы были возможности потренироваться с другими ребятами, — рассказала Ларина. — Всем родителям я бы хотела сказать, что ничего невозможного нет. Нельзя никогда говорить своему ребенку: «не стремись, ты этого никогда не достигнешь». Когда родители дают такую установку, ребенок никогда ничего не достигнет, нужно давать правильные установки».

Всего российские тхэквондисты на Олимпиаде в Токио завоевали четыре медали. Золото сборной, помимо Ларина, принес Максим Храмцов (весовая категория до 80 кг). Серебряную медаль завоевала Татьяна Минина (до 57 кг), бронзовую — Михаил Артамонов (до 58 кг).

Предложения со словом «развивался»

Мы нашли 80 предложений со словом «развивался». Также посмотрите синонимы «развивался».
Значение слова

• Арсеньеву особенно мучило то, что умственно ребенок развивался быстро, а физически оставался младенцем.
• Голос развивался сам собою и вот я уже студент первого курса ГИТИСа.
• Роман с Ле Боном развивался в 1949-м и 1950-м годах.
• Володя умственно и физически развивался быстро, заметно опережая сверстников.
• В первом документе развивался тезис посла о том, что Наполеон утратил поддержку французского народа.
• Я скажу о нём читателю, чтобы дать представление о том, как развивался мой характер.
• Город стремительно богател и развивался, что притягивало сюда предприимчивых людей всех профессий, стремившихся к общению и процветанию.
• В противовес Нью-Йорку на Юге стремительно развивался Новый Орлеан.
• Не позволяя себе расслабляться как в учебном плане, так и в других сферах жизни, и у меня развивался комплекс.
• Однако до двух лет Эрнестино рос и развивался нормально, пока у него не обнаружилась астма, спровоцированная простудой.
• Он здоровел и развивался, но вся поездка прошла для него, как сон, не оставив никаких следов в его воображении.
• Ведь это та спаянная цепочка, в которой развивался, закалялся и к тайнам которой был допущен Уинстон Черчилль.
• Выбор был сделан, поэтому мы деликатно отошли в сторону, все мы, у кого на глазах развивался этот роман.
• Их роман развивался в непривычной и удивительной тайне.
• Развивалось общество, развивался и фаворитизм.
• Стремительно рос и развивался банк, а вместе с ним двигалась и моя карьера.
• В умственном отношении он развивался в эту пору чрезвычайно быстро.
• Франкфурт в то время активно развивался как один из крупнейших немецких торговых центров.
• Прорыв обороны противника развивался медленно.
• Диалога в фильмах не было, сюжет развивался вне слов, но звук при этом играл очень важную роль.
• Хемниц быстро развивался и, как следствие, большую роль в его жизни играла строительная отрасль.
• Я же развивался интеллектуально так медленно, что пространство и время занимали мои мысли, когда я стал уже взрослым.
• Родился в семье рабочего и развивался в хороших материально-бытовых условиях.
• Этот прелестный роман развивался на глазах Чехова и доставил ему немало и веселых, и тревожных минут.
• Не знаем и того, как развивался этот не совсем обычный роман.
• О том, как жил, развивался и учился последний в школьном возрасте, известно весьма мало.
• Он развивался, как всегда у Светланы, стремительно.
• Как бы там ни было, кто бы ни основал Каменец-Подольский, а город развивался своим путем.
• На живой, практической работе развивался действенный гуманизм будущего писателя.
• Его характер развивался по образцу этих героев: он старался уподобиться им.
• Я был свидетелем того, как развивался тот конфликт между ним и Масловым.
• В конце концов, даже сам Эйнштейн не мог с уверенностью рассказать, как развивался процесс рождения теории.
• Одновременно с Екатерининским дворцом возник, а затем рос и развивался Екатерининский парк.
• Ее роман с Брюсовым развивался довольно быстро, хотя до традиционной поездки на курорт Финляндии оставалось еще время.
• Жанр активно развивался в Европе XII века и стал необыкновенно популярным в эпоху Возрождения.
• Действительно, в смутные годы, проведенные в Вене, в нем, параллельно со страстью к архитектуре, развивался интерес к политике.
• Не нужно забывать, что он развивался совершенно самостоятельно, без всякой помощи и руководительства с чьей бы то ни было стороны.
• Светало быстро, и с приходом дня бой развивался с новой силой.
• Шолохов развивался как обыкновенный человек.
• Иван быстро развивался физически и в свои 13 лет выглядел сущим верзилой.
• https://sinonim.org/
• Ход дальнейших событий развивался в соответствии с изначальной идеей Шри Ауробиндо.
• Еще в середине девятнадцатого столетия над Гонконгом развивался английский флаг.
• У нас были неформалы, и над баррикадой развивался черный флаг с анархией.
• Город быстро развивался как промышленный центр.
• Юноша жил и развивался, когда строилась послереволюционная Россия.
• Образ «троицы» развивался преимущественно во времени.
• Были созданы операционный центр, кредитные модули, уверенно развивался бесфилиальный банкинг.
• В какой музыкальной среде развивался Штраус?
• Посмотрим теперь, среди каких условий развивался нравственный характер Бэкона.
• Это было то самое время, когда я сам усложнялся и развивался.
• А между тем Garanti активно развивался, стремясь реализовать все то, что было запланировано, в соответствии со своим видением будущего.
• И вместе с девочками Соловьевыми развивался музыкально и я.
• Да и в других отношениях среда, в которой развивался Коперник, могла назваться благоприятной.
• Он рос правильно, был силен и крепок, но развивался очень медленно: поздно начал ходить, поздно заговорил.
• На протяжении всего семнадцатого века жанр придворного балета развивался главным образом во Франции.
• Как вы считаете, если государство, власть сейчас действительно хочет, чтобы бизнес развивался, что оно должно сделать?
• В штатах юга США активно развивался мужиковатый, пропитанный самогонкой и мифологией Гражданской войны южный рок.
• Этот сюжет развивался следующим образом.
• Скорее всего, вирус, отвечающий за вампиризм, развивался вместе с человеком.
• Но я развивался так медленно, что начал задаваться вопросами о пространстве и времени тогда, когда уже вырос.
• Вот та нравственная атмосфера, среди которой рос и развивался гений Лобачевского.
• Он быстро развивался физически и в свои годы выглядел сущим верзилой.
• Умный и впечатлительный ребенок быстро развивался.
• Развивался он хорошо, физически был крепок, как редкий из его сверстников, учился шутя, не докучал никому.
• Скорее всего, фактор, отвечающий за вампиризм, развивался вместе с человеком.
• По мере того как развивался наш роман, я теряла связь все с большим числом своих прежних друзей.
• В сценах Венеры и Вулкана развивался целый танцевально-пантомимный диалог с пылкими чувствами.
• Его бизнес с бандами развивался успешно.
• В административном отношении он поначалу развивался даже быстрее, чем аналогичные организации во Франции, Англии и США.
• Штыковой бой развивался, как правило, на ограниченных участках местности, был непродолжительным, жестоким и кровопролитным.
• Он развивался физически и верил в себя, занимаясь дзюдо в местном клубе.
• Направляемый таким прекрасным, таким опытным наставником, талант ребенка с самого начала развивался правильно.
• Контакт развивался вполне успешно: приглашение на ланч со стороны журналиста, ответное приглашение с моей стороны.
• Жанна какое-то время была в тени, потому что я развивался.
• Петр рос и развивался чрезвычайно быстро: на шестом месяце стал ходить.
• Воображение рисует прекрасного мальчика, который тихо рос и быстро развивался в тенистых садах, расположенных на красивых берегах Темзы.
• Занявший три томительных заседания диалог развивался по неизменной схеме.
• По письмам государыни Гримму можно проследить, как от года к году развивался любимец российской самодержицы.
• Выкачивая ресурсы из пробуждающейся российской глубинки, город бурно развивался.
• В Черновцах мы его обследовали, из-за недоедания у него развивался рахит.

Открыть другие предложения с этим словом

Источник – ознакомительные фрагменты книг с ЛитРес.

Мы надеемся, что наш сервис помог вам придумать или составить предложение. Если нет, напишите комментарий. Мы поможем вам.

• Поиск занял 0.029 сек. Вспомните, как часто вы ищете, чем заменить слово? Добавьте sinonim.org в закладки, чтобы быстро искать синонимы, антонимы, ассоциации и предложения.

Пишите, мы рады комментариям

Главархив рассказал, как развивалось радиовещание в послевоенной Москве

После тяжелых военных лет в СССР началось массовое восстановление разных отраслей городского хозяйства. В том числе в 1945 году были предприняты шаги по модернизации в Москве радиовещания как средства для организации досуга горожан, рассказали в столичном Главархиве. 

Период с начала развития радио в Советском Союзе до окончания войны составил четверть века, и Москва смогла добиться больших успехов в этой сфере. В городе работало более 500 тысяч радиотрансляционных установок, а общая протяженность радиотрансляционных сетей составляла около пяти тысяч километров. Однако в начале 1941 года темпы развития радио существенно отставали от зарубежных. Именно тогда и было принято решение о совершенствовании системы, но реализацию проекта пришлось отложить из-за начала войны.

К вопросу развития радио вновь вернулись в 1944-м. Тогда в столице существовало уже две радиостанции, которые взяли на себя обслуживание до 70 тысяч абонентов. Работа продолжилась весной 1945 года, когда Моссовет принял решение, направленное на создание в городе современной технической базы для развития радиовещания. Также требовалось обновление коммуникаций, поскольку около 90 процентов используемого оборудования было сильно изношенным и устаревшим. Это тормозило развитие радиовещания, не росла и аудитория, мощностей не всегда хватало даже на качественное обслуживание уже подключенных абонентов. Большое количество столичных радиостанций было перегружено более чем в два раза, каждый день поступало в среднем до 400 жалоб от жителей на качество связи, плохую слышимость и перебои в трансляциях. На радиоподстанциях были перебои с электричеством, из-за чего жители районов, где это происходило, оставались полностью без радиовещания.

Во исполнение решения Моссовета от 1945 года в столице построили шесть трансформаторных подстанций, которые обеспечивали бесперебойную подачу электроэнергии. Благодаря этому количество радиоабонентов в Москве выросло на 50 тысяч, также значительно увеличилось качество радиосигнала, улучшилась слышимость, прекратились частые перебои. Кроме того, для удобства жителей столицы были открыты три новые радиоремонтные мастерские. Возросло и количество уличных громкоговорителей: в общественных местах установили 150 устройств. Также было отремонтировано 500 километров радиотрансляционных линий.

Город не только вводил в эксплуатацию новые радиоподстанции но и переоборудовал почти половину уже существующих, что позитивно сказалось на качестве радиовещания. Из работавших к 1 марта 1945 года 82 радиоподстанций к концу года 40 было модернизировано. Благодаря техническому переоснащению радиовещание в 1945-м стало двухпрограммным, а уже в 1947 году — трехпрограммным. Радио стало важной составляющей досуга москвичей. 

Определение, разработанное Merriam-Webster

de · vel · oped

| \ ди-ˈve-ləpt

, dē- \

: с относительно высоким уровнем индустриализации и уровня жизни

развитая страна

прошедшее время и причастие прошедшего времени
развивать

Предоставление основной хирургической помощи в отдаленных и сельских районах развитых, а также стран с низким и средним уровнем дохода

Задний план:

Хирургия все больше становится неотъемлемой частью общественного здравоохранения и развития систем здравоохранения во всем мире.Такая хирургическая помощь должна предоставляться одинакового типа и уровня как в городских, так и в сельских условиях. Однако предоставление основных хирургических услуг в отдаленных и сельских районах развитых, а также стран с низким и средним уровнем доходов остается совершенно неадекватным и создает большие проблемы.

Методы:

Хотя это и не предназначалось для систематического обзора, были рассмотрены некоторые аспекты первичной медико-санитарной помощи и ее хирургические аспекты в отдаленных и сельских районах.Инструменты поиска включали Medline, PubMed и Scopius. Были изучены проблемы со здоровьем, такие как качественная медицинская помощь и ограничения, а также инфраструктура, хирургический персонал, а также последствия для планирования, обучения и подготовки хирургической помощи в отдаленных районах.

Результаты:

Острая нехватка хирургов и анестезиологов в большинстве стран с низким и средним уровнем доходов означает, что перераспределение обязанностей и обучение клиницистов, не являющихся врачами (NPC), является единственным вариантом, особенно в большинстве развивающихся бедных стран.

Вывод:

Наилучшие способы оказания хирургической помощи сельским жителям еще предстоит четко определить. Однако современные хирургические методы, интегрированные со стратегией, изложенной Всемирной организацией здравоохранения, могут быть перенесены в сельские районы через специально организованные лагеря. Таким образом, сложные хирургические операции могут выполняться в больших объемах и с минимальными затратами даже во временных условиях.Однако обеспечение основной хирургической помощи в сельских и отдаленных районах может быть удовлетворено лишь частично как в развитых странах, так и в странах с низким и средним уровнем доходов, и потребуются годы, чтобы решить проблему неудовлетворенных хирургических потребностей в этих регионах.

18 продовольственных культур, выращенных в Северной и Южной Америке

Lance Cheung / U.S. Министерство сельского хозяйства

«Открытие» Христофором Колумбом Америки в 1492 году привело к появлению многих новых культур в Европе, а затем и в европейских колониях в Азии и Африке, навсегда изменив глобальный продовольственный ландшафт.Хотя именно европейские исследователи и колонизаторы транспортировали продукты из Нового Света в Старый, коренные народы, которые приручили эти растения на протяжении тысячелетий, в значительной степени оставались без внимания истории. Ниже приводится список одомашненных культур, которым мы обязаны коренным народам Нового Света.

• Амарант

  амарант

  Амарант. Пурпурный цвет листьев и цветов — это антоциановые пигменты.

  © Morskaja / Dreamstime.com

  Амарант, являвшийся основной культурой ацтеков и других мезоамериканских народов, был одомашнен в Мезоамерике, по крайней мере, в 4000 г. до н. Э.

• Авокадо

  авокадо

  Плоды авокадо ( Persea americana ).

  © Ruben Enger / Fotolia

  Авокадо, возможно, были независимо одомашнены в Мексике и Центральной Америке между 4000 и 2800 годами до нашей эры. Они имели особое культурное значение для майя.

• Фасоль

  зеленая фасоль

  Зеленая фасоль ( Phaseolus vulgaris ).

  wanko

  Фасоль обыкновенная ( Phaseolus vulgaris ), фасоль красная ( P.coccineus ) и фасоль лима ( P. lunatus ) были одомашнены в доколумбовой Америке.

• Какао

  плодов какао

  Плоды, растущие на стволе дерева какао ( Theobroma cacao ).

  © Norman Chan / Fotolia

  Точное происхождение какао (источника шоколада) является предметом споров, но, возможно, оно было одомашнено в Южной Америке, а затем завезено майя около 1500 лет назад.

• Маниока

  Маниока

  Клубни кассавы ( Manihot esculenta ).

  © Vinicius Tupinamba / Fotolia

  Также известный как маниок или юка, маниока, вероятно, была одомашнена 8–10 000 лет назад в южной Бразилии древними амазонскими народами.

• Чиа

  Семена чиа

  Съедобные семена растения чиа ( Salvia hispanica ), произрастающего в Мексике и Гватемале. Семена чиа богаты омега-3 жирными кислотами и при замачивании в воде образуют гелеобразную пленку.

  © charlottelake / Fotolia

  Чиа широко культивировалась в доколумбовой Мезоамерике и была важным продуктом питания ацтеков.

• Кукуруза (кукуруза)

  кукуруза

  Кукуруза ( Zea mays ).

  burgkirsch

  Кукуруза, одна из самых древних культур Нового Света, была одомашнена ольмеками и майя в Мексике около 10 000 лет назад.

• Папайя

  дерево папайи

  Дерево папайи ( Carica papaya ).

  © Вильфредо Родригес

  Хотя история одомашнивания папайи не решена, плоды выращивались и развивались майя по крайней мере 4000 лет назад.

• Арахис

  Растение арахис

  Выкорчеванное растение арахиса ( Arachis hypogaea ) со зрелыми бобовыми.

  © axway / Fotolia

  Считается, что арахис был впервые одомашнен в древней Боливии.

• Перец

• Ананас

  Ананас ( Ananas comosus )

  Предоставлено Dole Food Company, Inc.

  Растение ананаса произрастает на юге Бразилии и Парагвая, хотя время его появления было доколумбовым. одомашнивание сомнительно.

• Картофель

  картофель

  Сорт картофеля ( Solanum tuberosum ).

  Фрэнсис Фрут — iStock / Thinkstock

  Считается, что картофель несколько раз выращивался самостоятельно и в основном выращивался инками еще 1800 лет назад.

• Квиноа

  Растение квиноа

  Квиноа ( Chenopodium quinoa ), произрастающее в боливийском регионе Альтиплано.

  Quinoa Corporation

  Квиноа неоднократно самостоятельно выращивалась в высокогорных районах Анд около 3000–5000 лет назад и была основным продуктом питания для народов инков, аймара и кечуа, в частности.

• Кабачки

  тыквы и тыквы

  Разновидности тыкв и тыкв ( видов Cucurbita, ).

  © Дуайт Смит / Dreamstime.com

  Множественные виды кабачков, в том числе тыквы, цуккини и тыквы с твердой скорлупой, были независимо одомашнены по всей Америке и являются одними из самых ранних американских культур.

• Подсолнечник

  подсолнечник

  Подсолнечник ( Helianthus annuus ).

  Том Брейкфилд — Фотодиск / Getty Images

  Подсолнухи были одомашнены в восточной части Северной Америки около 4000 лет назад.

• Сладкий картофель

  Сладкий картофель

  Нарезанный сладкий картофель ( Ipomoea batatas ). Крахмалистый корень богат витамином А.

  © Brent Hofacker / Shutterstock.com

  Сладкий картофель, вероятно, возник в тропической Центральной Америке, хотя история его одомашнивания сомнительна.

• Tomatillo

  tomatillo

  Плоды томатилло ( Physalis philadelphica ). Кислые, острые фрукты можно есть свежими, и их обычно готовят в пикантных соусах.

  © zigzagmtart / Fotolia

  Считается, что томатилло впервые приручили ацтеки в центральной Мексике около 800 г. до н. Э.

• Помидор

  томат, семейная реликвия

  Сорт томатов семейной реликвии ( Solanum lycopersicum ).

  © Media Bakery

  Считается, что помидоры возникли в Андском регионе, но история их одомашнивания остается невыясненной.

История пороговых значений бедности | ASPE

Развитие и история U.S. Пороги бедности —

Краткий обзор

от
Гордон М. Фишер,
Департамент здравоохранения и социальных служб

[ GSS / SSS Newsletter [Информационный бюллетень Секции государственной статистики и Секции социальной статистики Американской статистической ассоциации], зима 1997 г., стр. 6-7]

Ввиду недавнего крупного предложения по пересмотру способа измерения бедности в Соединенных Штатах, может быть полезно проанализировать развитие и последующую историю текущих официальных пороговых значений бедности.

Порог бедности был первоначально разработан в 1963-1964 годах Молли Оршански из Управления социального обеспечения. Она опубликовала анализ бедного населения с использованием этих пороговых значений в статье бюллетеня социального обеспечения за январь 1965 года. Оршанская основывала свои пороги бедности на продовольственном плане эконом-класса — самом дешевом из четырех продовольственных планов, разработанных Министерством сельского хозяйства. Фактические комбинации продуктов питания в планах питания, разработанных диетологами Министерства сельского хозяйства с использованием сложных процедур, представляют собой диетически адекватные диеты; Министерство сельского хозяйства охарактеризовало план питания эконом-класса как «предназначенный для временного или чрезвычайного использования при нехватке средств.(Оршанский также разработал второй набор пороговых значений бедности, основанный на несколько менее строгом плане Департамента сельского хозяйства в отношении недорогих продуктов питания, но эти более высокие пороговые значения когда-либо использовались относительно редко.)

Оршанский знал из Обследования потребления пищевых продуктов домашними хозяйствами 1955 года Министерства сельского хозяйства (последнее из доступных обследований на тот момент), что семьи из трех и более человек тратили около одной трети своего дохода после уплаты налогов на продукты питания в 1955 году. Соответственно, она подсчитала. пороговые значения бедности для семей из трех и более человек, если взять долларовые затраты на экономичный план питания для семей такого размера и умножить затраты на коэффициент три — «множитель».Фактически, она взяла гипотетическую среднюю семью, тратящую треть своего дохода на продукты питания, и предположила, что ей необходимо резко сократить свои расходы. Она предположила, что расходы на продукты питания и непродовольственные товары будут сокращены с той же скоростью. Когда расходы на питание гипотетической семьи достигли стоимости продовольственного плана эконом-класса, она предположила, что сумма, которую семья будет тратить на непродовольственные товары, также будет минимальной, но достаточной (ее процедура не предполагала конкретных долларовых сумм. для любой бюджетной категории, кроме еды.Она вывела пороговые значения бедности для семей из двух человек, умножив долларовую стоимость плана питания для этой семьи на несколько более высокий множитель (3,7), также полученный из обследования 1955 года. Она вывела пороги бедности для единиц, состоящих из одного человека, непосредственно из пороговых значений для единиц из двух человек, без использования множителя. Базовым годом для первоначальных пороговых значений был 1963 календарный год.

Оршанский дифференцировал свои пороги не только по размеру семьи, но и по статусу фермерского / несельскохозяйственного, по полу главы семьи, по количеству членов семьи, которые были детьми, и (только для одно- и двухместных домов) по возрасту. / непостоянный статус.Результатом стала подробная матрица из 124 пороговых значений бедности, хотя обычно приводимые цифры представляли собой средневзвешенные пороговые значения для каждого размера семьи.

В своей статье, опубликованной в январе 1965 года, Оршанский представила пороги бедности как меру недостаточности доходов, а не адекватности доходов — «если невозможно однозначно заявить,« сколько достаточно », то можно с уверенностью утверждать, сколько в среднем слишком мало «.

Хотя пороговые значения бедности были рассчитаны на основе денежного дохода после уплаты налогов, они были применены к данным о доходах — текущему обследованию населения Бюро переписи — в котором использовалось определение денежного дохода до налогообложения; это было сделано потому, что при разработке пороговых значений Текущее обследование населения было единственным надежным источником репрезентативных данных о доходах на национальном уровне.Оршанский знал о возникшей непоследовательности, но другой альтернативы не было; она рассудила, что результат даст «консервативную недооценку» бедности.

В апреле-мае 1965 г. было решено установить пороговые значения бедности для фермерских хозяйств на уровне 70 процентов от соответствующих пороговых значений для несельскохозяйственной деятельности и обновить пороговые значения для ежегодных изменений цен путем ежегодного изменения затрат на душу населения в рамках экономического плана питания. В мае 1965 года — всего через год после того, как администрация Джонсона инициировала войну с бедностью, — Управление экономических возможностей приняло пороговые значения бедности Оршанского в качестве рабочего или квазиофициального определения бедности.

Еще в ноябре 1965 года политики и аналитики Управления социального обеспечения начали выражать озабоченность по поводу того, как скорректировать пороговые значения бедности для повышения общего уровня жизни. (Имеются обширные исторические свидетельства из США и других стран, что последовательные черты бедности, определяемые как черты абсолютной бедности, демонстрируют тенденцию к повышению в реальном выражении по мере роста реальных доходов населения в целом; это свидетельство обсуждается в статье автора «Относительные или Абсолют — новый взгляд на поведение черты бедности с течением времени », в выпуске этого информационного бюллетеня летом 1996 года.) В 1968 году Управление социального обеспечения попыталось сделать очень скромный шаг в направлении повышения порога бедности, чтобы отразить повышение общего уровня жизни. Бюджетное бюро (предшественник Управления управления и бюджета) запретило умеренное увеличение пороговых значений бедности, но инициировало создание межведомственного комитета по пересмотру уровня бедности для переоценки пороговых значений бедности. Этот комитет решил скорректировать пороговые значения только для изменения цен, а не для изменения общего уровня жизни.В 1969 году Комитет решил, что пороговые значения будут индексироваться по индексу потребительских цен, а не по расходам на душу населения, предусмотренным планом экономичного питания, и что пороги бедности для фермерских хозяйств будут установлены на уровне 85 процентов, а не 70 процентов от соответствующих пороговых значений для несельскохозяйственной деятельности. В августе 1969 года Бюджетное бюро определило пороги бедности с этими поправками в качестве официального статистического определения бедности федеральным правительством.

В 1973 году были сформированы три межведомственных подкомитета для проведения тщательного обзора федеральной статистики доходов и бедности.Подкомитет по обновлению порога бедности рекомендовал обновлять пороговые значения бедности каждые десять лет с использованием пересмотренного плана питания и множителя, полученного на основе последнего имеющегося обследования потребления продуктов питания; это, как правило, привело бы к более высокому порогу бедности при каждом пересмотре за десятилетие. Подкомитет также рекомендовал, чтобы определение дохода, используемое для измерения общего дохода, также совпадало с определением дохода, используемым для расчета множителя для пересмотренных пороговых значений бедности.По результатам обзора статистики бедности и доходов в 1973 году никаких изменений в определение бедности внесено не было.

В 1974 г., в ответ на требование Конгресса, была создана межведомственная целевая группа по исследованиям бедности для проведения интенсивного обзора существующих мер бедности и альтернативных схем измерения. Заключительный отчет «Мера бедности » был представлен Конгрессу в 1976 году вместе с семнадцатью техническими документами. В этом отчете подробно исследуются вопросы, связанные с разработкой и пересмотром показателей бедности, но не рекомендованы конкретные изменения в текущих показателях бедности.

В 1981 году в соответствии с рекомендациями межведомственной комиссии в порог бедности был внесен ряд незначительных изменений. Разница между фермерским и несельскохозяйственным сектором была устранена путем применения пороговых значений несельскохозяйственной бедности ко всем семьям. Различие между порогами для семей «возглавляемых женщинами» и «возглавляемыми мужчинами» было устранено усреднением. Матрица пороговых значений бедности была расширена, чтобы сделать категорию наибольшего размера семьи «девять или более человек», а не «семь или более человек».»Эти изменения уменьшили количество пороговых значений в подробной матрице пороговых значений бедности со 124 до 48.

В 1980-е годы велись широкие дебаты об измерении бедности — особенно о предложениях считать государственные неденежные пособия доходом для измерения бедности без внесения соответствующих изменений в пороговые значения бедности. (Комментарии по этим предложениям см. На стр. 9, 65–66, 205 и 227–231 отчета, цитируемого в следующем параграфе.) Однако в течение 1980-х годов в официальное определение бедности не было внесено никаких изменений.

В 1990 году комитет Конгресса попросил Национальную академию наук / Национальный исследовательский совет провести исследование официального показателя бедности в США, чтобы обеспечить основу для возможного пересмотра показателя бедности. В 1992 году Комитет национальной статистики NRC назначил Группу по вопросам бедности и помощи семьям для проведения этого исследования. В мае 1995 года Группа опубликовала свой отчет об исследовании (Констанс Ф. Ситро и Роберт Т. Майкл (редакторы), Измерение бедности: новый подход , Вашингтон, округ Колумбия).C., National Academy Press, 1995). В отчете Группа предложила новый подход к разработке официального показателя бедности для США, хотя и не предлагала конкретный набор долларовых цифр. Предложение Комиссии было обобщено и обсуждено в ряде источников, включая более ранние выпуски этого информационного бюллетеня.

(Эта статья представляет собой резюме Гордона М. Фишера, «Развитие и история пороговых значений бедности», Бюллетень социального обеспечения , том.55, No. 4, Winter 1992, pp. 3-14; статья Bulletin была сокращена из 75-страничной неопубликованной статьи. [Этот неопубликованный документ — впоследствии отредактированный до 88 страниц — доступен на веб-сайте Бюро переписи населения по измерению бедности.] Мнения, выраженные здесь, принадлежат автору и не отражают позицию Министерства здравоохранения и социальных служб.)

В космосе было создано

снимков Луны эпохи Аполлона. Вот как.

Прежде чем Нил Армстронг смог сделать свой исторический первый шаг на Луну, НАСА должно было точно знать, где может безопасно приземлиться космический корабль «Аполлон-11».В начале 1960-х годов человеческие карты лунной поверхности основывались на фотографиях, сделанных с Земли и нескольких первых американских и советских спутников, ни один из которых не мог охватить всю глубину и детализацию, необходимую для поиска мест посадки вдали от опасных валунов и кратеров.

Вот почему космическое агентство запустило свою программу Lunar Orbiter, флот из пяти почти идентичных спутников размером с фургон, отправленных в 1966 и 1967 годах для картографирования Луны. Lunar Orbiter 3, который делал снимки с 15 по 23 февраля 1967 года, подтвердил безопасные места посадки для программы Apollo, вернув некоторые из последних снимков Луны, сделанных до того, как люди ступили на лунный грунт.

Пожалуйста, соблюдайте авторские права. Несанкционированное использование запрещено.

Пожалуйста, соблюдайте авторские права. Несанкционированное использование запрещено.

Слева : В 2009 году Лунный разведывательный орбитальный аппарат НАСА сделал снимки исторического места посадки Аполлона-11. Безопасная посадка этой миссии в 1969 году стала возможной отчасти благодаря программе Lunar Orbiter.

Фотография НАСА / GSFC / Государственного университета Аризоны

Справа : Лунные орбитальные аппараты также вернули изображения обратной стороны Луны, такие как этот снимок, сделанный Lunar Orbiter 3 в 1967 году.

Фотография НАСА

В доцифровую эпоху отправка фотографий из космоса обратно на Землю не была случайной задачей. Но с точным проектированием — и некоторыми сверхсекретными технологиями разведки — Лунные орбитальные аппараты предоставили инженерам и ученым НАСА изображения, необходимые им для посадки Аполлона.

Камеры в космосе

Лунные орбитальные аппараты не были первыми космическими аппаратами с фотофокусировкой, направленными на Луну, но они были уникальными из-за оборудования, которое они несли.

«По сути, они позаимствовали шпионские камеры у Министерства обороны из своей спутниковой программы», — говорит Дэвид Уильямс, исполняющий обязанности главы Скоординированного архива данных космической науки НАСА. В то время Министерство обороны США использовало аналогичные камеры в программе CORONA, известной широкой публике как Discoverer, для создания спутниковых снимков Советского Союза.

Каждый Lunar Orbiter имел две камеры: одну с объективом высокого разрешения, а другую — со средним разрешением. Вместо стандартной 35-миллиметровой пленки в спутниках использовалась 70-миллиметровая пленка — тот же размер, который сегодня используется для создания фильмов IMAX.

Справа налево: Клифф Нельсон, Кэлвин Брум, Исраэль Табак и Джо Мурман из НАСА исследуют компонент камеры космического корабля Lunar Orbiter.

Фотография НАСА

Пожалуйста, соблюдайте авторские права. Несанкционированное использование запрещено.

Лунные орбитальные аппараты с высоты нескольких сотен миль над поверхностью Луны запечатлели детали до трех футов шириной. Но использование пленки в космосе столкнулось с серьезным препятствием.

«Оказавшись на Луне, вы можете делать все снимки, сколько захотите, но у вас нет возможности вернуть пленку на Землю для ее проявления», — говорит Уильямс.«Поэтому им пришлось разработать систему, в которой пленка проявляется на борту космического корабля».

Плавающая фотолаборатория

Проявление пленки обычно требует промывки негативов серией жидких химикатов, которые могут нанести ущерб спутнику в условиях микрогравитации. Вместо этого Лунные орбитальные аппараты использовали систему обработки передачи данных Kodak BIMAT, которая была классифицирована Центральным разведывательным управлением до 2001 года, поскольку была создана в первую очередь для разведки.

Пленку нужно было точно переместить сначала с катушки для хранения на линзу, затем в зону хранения, когда были сделаны оставшиеся фотографии, и, наконец, на стадию проявления, где слой желатина с химическим составом был прижат к фильм.Задания выполнялись в алюминиевых кадках размером с арбуз. Перегорание одного движущегося пленки двигателя, как это произошло на Lunar Orbiter 3 после того, как он сделал пару сотен кадров, было достаточно, чтобы поставить под угрозу успех миссии.

Ракета, несущая Lunar Orbiter 3, взлетает с мыса Канаверал.

Фотография НАСА

Пожалуйста, соблюдайте авторские права. Несанкционированное использование запрещено.

Когда вы заглядываете внутрь спутника Lunar Orbiter, «это интересный взгляд на отношения во время холодной войны», — говорит Мэтт Шинделл, куратор Смитсоновского национального музея авиации и космонавтики.«Вы видите все оборудование Eastman Kodak, которое там есть … и вы видите камеру, разработанную нашими спецслужбами, а затем у вас есть все оборудование НАСА».

Чтобы отправить свои фотографии на Землю, программа CORONA сбросила пленку из космоса в капсулах, снабженных теплозащитными экранами для защиты при входе в атмосферу, двигателями для управления и стабилизации и парашютами для замедления их падения. Самолет-эвакуатор был построен, чтобы зацепить капсулу в воздухе с помощью парашюта, но когда это не удалось, вертолетная группа поднимала ее с воды.Однако вместо этого НАСА разработало систему для отправки фотографий домой по радио.

На Lunar Orbiters пленку перемещали перед сканером, который просвечивал через нее и регистрировал уровни яркости каждого измеренного ею крошечного участка. Затем эти числа были отправлены по радиосигналу в центры связи в дальнем космосе НАСА в Испании, Австралии и США, где измерения были записаны на магнитную ленту. Затем обработчики изображений могли бы использовать числа для воссоздания пленочных снимков на Земле и склеивать полоски вместе, чтобы проявить высокодетализированные фотографии.

«Вы можете взять увеличительное стекло и посмотреть на них очень внимательно и просто увидеть все эти детали; это действительно невероятно », — говорит Уильямс. «Учитывая, что это была середина или конец 60-х, это было действительно потрясающее достижение».

Во благо науки

Некоторые из полученных изображений, например знаменитая фотография Земли за горизонтом Луны, сделанная аппаратом Lunar Orbiter 1, показывают вертикальные линии процесса реконструкции. Несмотря на теории об обратном, маловероятно, что НАСА вмешивалось в качество изображения, прежде чем опубликовать свои фотографии.

Земля «восходит» над Луной на знаменитой фотографии, сделанной Lunar Orbiter 1.

Фотография NASA

Пожалуйста, соблюдайте авторские права. Несанкционированное использование запрещено.

«Они не стеснялись публиковать то, что они считали хорошими репрезентативными изображениями, чтобы люди могли увидеть, что космическая программа США способна на эти великие дела», — говорит Шинделл. На протяжении всей миссии изображения Lunar Orbiter появлялись в газетах и ​​журналах по всему миру.

«Даже несмотря на то, что это была космическая гонка и она была высококонкурентной, — говорит Шинделл, — все еще существовала своего рода атмосфера, когда это делалось на благо не только стран, которые это делают, но и науки». вокруг света.”

Повышенная эффективность моноклонального антитела, не содержащего фукозу, разрабатываемого в качестве иммунопротектора вируса Эбола

Abstract

В настоящее время не существует контрмер для предотвращения или лечения тяжелых последствий инфекции филовирусом (например, вирусом Эбола; EBOV). Чтобы преодолеть это ограничение в нашей готовности к биозащите, мы разработали моноклональные антитела (mAb), которые можно использовать у людей в качестве иммунопротекторов против EBOV, начиная с мышиных mAb (13F6), которые распознают сильно гликозилированный муцин-подобный домен прикрепленного к вириону гликопротеин (ГП).Точечные мутации вводили в вариабельную область мышиных mAb для удаления предсказанных человеческих Т-клеточных эпитопов, а вариабельные области соединяли с человеческими константными областями для получения mAb (h-13F6), подходящего для разработки для использования человеком. Мы оценили эффективность трех вариантов h-13F6, несущих разные паттерны гликозилирования, на летальной модели заражения EBOV у мышей. Было обнаружено, что характер гликозилирования различных mAb коррелирует с уровнем защиты, причем агликозилированный h-13F6 обеспечивает наименьшую эффективность (ED ₅₀ = 33 мкг).Вариант с типичными гетерогенными гликоформами млекопитающих (ED ₅₀ = 11 мкг) имел эффективность, аналогичную исходному мышиному mAb. Однако h-13F6, несущий комплекс N -гликозилирование без коровой фукозы, проявлял превосходную эффективность (ED ₅₀ = 3 мкг). Исследования связывания с использованием рецепторов Fcγ выявили усиленное связывание нефукозилированного h-13F6 с мышиным и человеческим FcγRIII. В совокупности результаты показывают, что присутствие Fc N -гликанов усиливает защитную эффективность h-13F6, и что mAb, полученные с однородным гликозилированием и более высокой активностью гликоформы, являются многообещающими в качестве терапевтических средств биозащиты.

Вирусы Эбола (EBOV; семейство Filoviridae) являются одними из наиболее известных инфекционных агентов с наибольшей опасностью и вызывают острую и часто смертельную геморрагическую лихорадку у людей и нечеловеческих приматов. Сообщалось, что EBOV использовалась в качестве оружия в бывшем Советском Союзе (1), и регулярно происходят естественные спорадические вспышки, вызывающие локализованную высокую заболеваемость и смертность. Из-за своей заразности и скорости современных путешествий любая вспышка может перерасти в международную эпидемию.В настоящее время отсутствуют лицензированные вакцины или препараты для лечения EBOV. Вакцины и противовирусные препараты на основе моноклональных антител (mAb) были определены Министерством здравоохранения и социальных служб США в качестве приоритетных для защиты от EBOV, используемого в актах биотерроризма или войны.

13F6 — мышиное mAb, одно из четырех mAb против гликопротеина (GP) с высокой защитой от EBOV, идентифицированных в Медицинском научно-исследовательском институте инфекционных заболеваний армии США (2). 13F6 распознает сильно гликозилированный муцин-подобный домен EBOV GP и, как было показано, обеспечивает 100% профилактическую и терапевтическую защиту на модели заражения мышей (2).Мышиные mAb обладают высокой иммуногенностью для человека, поэтому, чтобы сделать mAb-иммунопротектор более подходящим для использования человеком, в этом исследовании мы предприняли деиммунизацию (3) вариабельных областей 13F6 и химеризацию их константными областями человеческого IgG ₁ . В то время как прививка CDR / гуманизация mAb максимизирует содержание аминокислот, полученных из других последовательностей антител человека, деиммунизация направлена ​​на идентификацию и устранение эпитопов Т-клеток из последовательностей вариабельной области антител.

Механизм (ы), с помощью которых 13F6 защищает in vivo, в значительной степени неизвестен.13F6 не нейтрализует in vitro, что оценивается по ингибированию образования бляшек, даже в присутствии комплемента (2), что свидетельствует о важной роли Fc-опосредованных эффекторных функций в защите in vivo. Хотя это не требуется для классической нейтрализации вируса стерическими препятствиями, гликозилирование Fc необходимо для уничтожения инфицированных вирусом клеток за счет комплемент-зависимой цитотоксичности (CDC) и антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC; ссылки 4 и 5). Активность CDC инициируется связыванием белка комплемента c1q с Fc-областями кластеров IgG, связанных с инфицированной клеткой, отображающей вирусный антиген.Аналогичным образом, активность ADCC инициируется связыванием FcγRI (CD64) и FcγRIII (CD16) на поверхности полиморфно-ядерных клеток (PMN) или клеток естественных киллеров (NK) с областью Fc IgG, связанной с инфицированными клетками. С развитием измененных путей гликозилирования в дрожжах (6), растениях (7) и культуре клеток млекопитающих (8) недавние исследования начали выяснять роль специфических гликанов в обеспечении этих эффекторных функций. Например, было показано, что удаление коровой фукозы резко улучшает активность ADCC in vitro и in vivo за счет улучшения сродства к FcγRIII (7-11).

Для иммунопротектора EBOV разрабатываются две производственные системы: традиционное производство культур клеток млекопитающих в клетках яичников китайского хомячка (СНО) и временное производство с использованием вирусных векторов (magnICON; Bayer) в Nicotiana benthamiana (12, 13). Используя трансгенную линию N. benthamiana (ΔXTFT), не имеющую специфичных для растений N -гликановых остатков (14), можно получить mAb с высокогомогенными человеческими гликоформами (9, 14, 15). Сравнение эффективности продуцируемого агликозилированного и гликозилированного h-13F6 в двух различных системах продуцирования может помочь идентифицировать механизм (ы) действия и предпочтительную производственную систему для продолжения разработки терапевтического средства против EBOV.

Результаты

Гликоформа на mAb h-13F6 Произведено в

Nicotiana .

Исходные мышиные вариабельные области 13F6 были деиммунизированы, как описано (3), а затем были химеризованы с человеческими константными областями для получения h-13F6 (JN374688 и JN374689). Полученная деиммунизированная химерная ДНК mAb (h-13F6) экспрессировалась в двух разных системах. Первая система, клетки CHO, в настоящее время являются наиболее распространенной платформой, используемой для производства одобренных FDA рекомбинантных mAb.Стабильная линия h-13F6 CHO была использована для получения mAb h-13F6, которое содержало типичные гликаны, обычно обнаруживаемые в рекомбинантных антителах (рис. 1). Второй способ получения — это временная растительная система (magnICON; ссылки 12 и 16), в которой гены тяжелой и легкой цепей клонированы в отдельные векторы, содержащие разные, но совместимые вирусные репликоны, чтобы обеспечить одновременную экспрессию тяжелых и легких цепей в результате репликации. вирусные сегменты. Затем векторы тяжелой и легкой цепей были введены в Agrobacterium tumefaciens , чтобы обеспечить высокую эффективность заражения 1-месячного возраста N.benthamiana путем вакуумной инфильтрации.

Рис. 1.

Профиль гликозилирования N различных гликоформ h-13F6 и ритуксана, определенный с помощью LS-ESI-MS. Цифры обозначают присутствие различных видов гликопротеинов в%. Незначительные гликоформы (менее 5%) не указаны. N — номенклатура гликанов согласно www.proglycan.com.

В дополнение к ДНК h-13F6, используемой для экспрессии в клетках или растениях СНО, мы создали дополнительную конструкцию, содержащую аланин по N297 константной области тяжелой цепи человеческого IgG ₁ (h-13F6 _agly ), чтобы полностью устранить гликозилирование Fc.H23F6 _agly выпускался в заводской системе.

Для генерации mAb h-13F6 с уникальными гликоформами, растений N. benthamiana , используемых для заражения Agrobacterium и последующего продуцирования антител, в свою очередь, модифицировали экспрессией РНКи, чтобы устранить экспрессию эндогенной специфической для растений ксилозил- и фукозилтрансферазы. гены (14).

Для определения гликоформ этих вариантов h-13F6 mAb очищали аффинной хроматографией на протеине A и подвергали анализу гликозилирования N с использованием LC-ESI-MS.Ритуксан, mAb, полученное из CHO, одобренное Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов, было включено в качестве контроля. Профиль гликозилирования N двух моноклональных антител, полученных из СНО (т. Е. H-13F6 _CHO и ритуксан), показал 3–5 гликоформ, большинство из них с фукозилированием ядра α1,6. В обоих случаях негалактозилированные G ₀ и моногалактозилированные G ₁ комплексные N -гликановые структуры были основными гликоформами (рис. 1). Напротив, в h-13F6 _ΔXF не было обнаружено фукозилированных структур. Этот вариант несет один главный комплекс N -гликановых видов, а именно GnGn, соответствующий структурам G ₀ без фукозы, полученным в результате продукции CHO (рис.1). Как и ожидалось, в h-13F6 _agly не было обнаружено гликановых структур.

Связывание вариантов h-13F6 с рецепторами Fcγ человека и c1q человека.

Поскольку h-13F6 разрабатывается для использования человеком, мы протестировали способность вариантов связываться с белками человека, важными для IgG Fc-опосредованных эффекторных функций, которые могут способствовать защитной эффективности mAb.

Сродство mAb к FcγRI (CD64).

Поверхностный плазмонный резонанс выполняли для определения сродства mAb h-13F6 к рекомбинантному человеческому FcγRI (таблица 1), рецептору, важному для ADCC (4, 5).h-13F6 _CHO имел сходное сродство к ритуксану, при этом mAb h-13F6 _ΔXF демонстрировало немного более сильное связывание ( P <0,05). Связывание h-13F6 _agly было значительно ( P <0,05) ниже, чем у всех других протестированных mAb.

Таблица 1.

Сродство mAb h-13F6 к человеческому FcγRI (CD64) и FcγRIII (CD16)

Сродство mAb к FcγRIII (CD16).

Поверхностный плазмонный резонанс также проводили с рекомбинантным FcγRIII (таблица 1), рецептором, важным для индукции ADCC NK-клетками (9, 10).Из молекул h-13F6 агликозилированная версия имела самое слабое сродство (12 ± 1,0 × 10 ⁻⁸ M), а CHO (7,1 ± 1,2 × 10 ⁻⁸ M) имела немного более высокое сродство ( P < 0,01), и h-13F6 _ΔXF , имеющий значительно более высокое сродство (2,5 ± 0,3 × 10 ^-8 M; P <0,005 по сравнению с h-13F6 _CHO ; P <0,001 по сравнению с h-13F6 _агли ). Примечательно, что все они имеют высокое сродство к тому, что традиционно считается рецептором с низким и средним сродством.Фактически, сродство ритуксана было в ~ 8 раз меньше, чем у h-13F6 _agly , в 13 раз меньше, чем у h-13F6 _CHO , и в 36 раз меньше, чем у h-13F6 _ΔXF ( P < 0,005 для всех сравнений).

Привязка C1q.

Связывание C1q с Fc-областью антител, первая стадия классического каскада комплемента, зависит от гликозилирования (4). Способность трех различных версий h-13F6 связывать человеческий c1q сравнивали (рис. 2) с помощью стандартного ELISA (17).Как и ожидалось, h-13F6 _agly не связывал c1q в тестируемых концентрациях. Напротив, наблюдали связывание как h-13F6 _CHO , так и h-13F6 _ΔXF , хотя h-13F6 _ΔXF был немного менее сильным связующим, чем h-13F6 _CHO и ритуксан.

Рис. 2.

ИФА связывания C1q. На планшеты для ELISA наносили различные концентрации mAb. После блокирования добавляли 2 мкг / мл человеческого C1q. Связывание C1q с mAb детектировали с использованием козьего поликлонального антитела против C1q человека с последующим использованием кроличьего антитела против козьего (адсорбированного человека) HRP-конъюгированного антитела.Планки погрешностей указывают SD ( n = 3).

Связывание mAb с мышиными FcγR.

Поскольку mAb h-13F6 тестировались на модели мышей, поверхностный плазмонный резонанс использовали для сравнения относительного связывания mAb с мышиными FcγRI, -II и -III в поддержку тестирования in vivo (а не для определения полная кинетика межвидового взаимодействия, имеющая мало значения за пределами данного исследования). С различными мышиными FcγR, захваченными на сенсорном чипе, фиксированная концентрация (5 мкг / мл) mAb пропускалась через чип (полученные сенсограммы показаны на рис.3). h-13F6 _CHO связывался лучше, чем h-13F6 _ΔXF и h-13F6 _agly с мышиными FcγRI и II, тогда как h-13F6 _ΔXF имел лучшее связывание, чем h-13F6 _CHO и h-13F6 _agly к мышиному FcγRIII.

Рис. 3.

Сенсограммы поверхностного плазмонного резонанса, показывающие связывание и диссоциацию mAb h-13F6 с мышиными FcγR. Приблизительно 1000 RU HIS-меченных рекомбинантных мышиных рецепторов Fcγ были связаны с сенсорным чипом NTA. Затем по поверхности протекали mAb h-13F6 (5 мкг / мл).

Эффективность mAb против летального заражения EBOV.

Чтобы определить, влияют ли различные N -гликоформы, присутствующие в Fc-области этих mAb, на эффективность in vivo, варианты h-13F6 были протестированы на хорошо известной летальной модели заражения EBOV. Группы мышей ( n = 10) получали однократно внутрибрюшинно. дозы mAb с последующим летальным заражением (1000 БОЕ, ~ 30 000 LD ₅₀ ). Полученные данные «доза-ответ» показаны на рис. 4. Несмотря на то, что была проведена высоколетальная контрольная заражение, выжили 20% контрольных мышей (рис.5). Это наблюдение является обычным из-за требования Институционального комитета по уходу за животными и их использованию, согласно которому мышей, демонстрирующих значительную заболеваемость, лечили пищевой добавкой DietGel. h-13F6 _ΔXF был более защитным (ED ₅₀ = 3 мкг ∼0,15 мг / кг), чем h-13F6 _CHO (ED ₅₀ = 11 мкг, ∼0,55 мг / кг). Для сравнения также показана защита, о которой сообщалось с исходным мышиным mAb 13F6 (2), и предполагается, что деиммунизация и химеризация мышиного mAb человеком не привели к изменению эффективности.Как и следовало ожидать, если защитная активность mAb затрагивает любые Fc-опосредованные механизмы эффекторной функции, агликозилированный h-13F6 _agly обеспечивает меньшую защиту (ED ₅₀ = 33 мкг, ~ 1,65 мг / кг). Относительная эффективность значительно различалась между h-13F6 _ΔXF и h-13F6 _CHO (относительная эффективность: 0,26, 95% доверительный интервал: 0,07–0,91) и между h-13F6 _ΔXF и h-13F6 _agly ( Относительная эффективность: 10,72, 95% доверительный интервал: 2.10–81,53).

Рис. 4.

Резюме эксперимента «доза-реакция» на мышах. Мыши ( n = 10) получали mAb внутрибрюшинно. За 1 день до i.p. испытание с 1000 PFU адаптированной к мышам вируса Эбола Заир. * P <0,05 по сравнению с 3 мкг h-13F6 _CHO и PBS (Mantel – Cox). ** P = 0,08 по сравнению с 30 мкг h-13F6 _CHO ; P <0,001 по сравнению с 30 мкг h-13F6 _agly и PBS. Данные по мышиному 13F6, полученные с использованием идентичных экспериментальных условий, представлены в таблице 1 в ссылке.2).

Рис. 5.

Кривые выживаемости для групп мышей, получавших низкие дозы (3 мкг). Данные для групп, описанных на рис. 4.

Кривые выживаемости для групп с низкими дозами (3 мкг, ∼0,2 мг / кг) показаны на рис. 5. Мыши, получавшие h-13F6 _ΔXF , были значительно защищены ( медиана выживаемости 18,5 дней) по сравнению с h-13F6 _CHO ( P <0,05; медиана выживаемости 7 дней) и отрицательным контролем PBS ( P <0,05; медиана выживаемости 6 дней).

Обсуждение

Результаты связывания h-13F6 для FcγRI и c1q согласуются с предыдущими отчетами, демонстрирующими, что отсутствие фукозы не влияет на связывание IgG ₁ (4, 18).Подобно другим сообщениям (8), отщепление коровой фукозы из h-13F6 (h-13F6 _ΔXF ) привело к повышению сродства к FcγRIII. Однако следует отметить, что все версии h-13F6 имели более высокое сродство к FcγRIII, чем ритуксан, и фактически проявляли высокое сродство к тому, что обычно считается рецептором с низким сродством. Возможным объяснением этого может быть различие в две аминокислоты между константными областями тяжелой цепи h-13F6 и ритуксана (R214K, V215A), которые могут влиять на конформацию области Fc, что может приводить к повышению сродства к FcγRIII.Альтернативно, аминокислоты, не являющиеся Fc, могут оказывать конформационное влияние на Fc-область. h-13F6 содержит редкую вариабельную область легкой цепи Vλx, а кристаллическая структура родительского mAb мыши показывает, что три области, определяющие комплементарность легкой цепи, принимают необычные конформации, отличные от Vκ и других легких цепей Vλ (19). Также заслуживает внимания относительно высокое сродство h-13F6 _agly к FcγRIII. Обычно считается, что агликозилированный IgG не способен (20) или очень слабо связывать FcγRIII (21).Поскольку 13F6 не нейтрализует in vitro, защитная активность, проявляемая h-13F6 _agly , может быть связана с низким уровнем активности ADCC.

Наши результаты предполагают, что гликозилирование Fc h-13F6 играет важную роль в противовирусной защите в модели EBOV у мышей. Эти результаты согласуются с недавним исследованием, которое показывает усиление опосредованного анти-лентивирусными клетками вирусного ингибирования не содержащих фукозу mAb против ВИЧ in vitro (9). Хотя h-13F6 _agly и способен к частичной защите в испытанных дозах, он был менее эффективен, чем h-13F6 _CHO , с гетерогенным гликозилированием типа млекопитающих.h-13F6 _ΔXF с гомогенными гликанами, лишенными сердцевины фукозы, показал повышенную защиту более чем в два раза. Удаление коровой фукозы резко улучшает ADCC-активность mAb, опосредованную NK-клетками (8), но, по-видимому, оказывает противоположный эффект на ADCC-активность PMN (22). Это предполагает, что повышенная эффективность h-13F6 _ΔXF может быть обусловлена ​​ADCC, опосредованной NK-клетками через FcγRIII. Действительно, ED ₅₀ для трех версий h-13F6 сопоставимы с K _D mAb для FcγRIII.Потенциальное предостережение при выводе из испытаний на мышах заключается в том, что данные in vivo были получены из mAb с участками Fcγ человека, взаимодействующими с рецепторами Fcγ мыши. Однако данные in vivo согласуются с данными связывания in vitro с рецепторами Fcγ мыши (фиг. 3), подтверждая вывод о том, что усиленная защита, обеспечиваемая h-13F6 _ΔXF , опосредуется улучшенной активностью ADCC. Кроме того, наблюдение эквивалентной защиты между исходной гибридомной мышиной 13F6 и h-13F6 _CHO (рис.4) в сочетании с предыдущим сообщением о том, что химерное mAb с IgG ₁ человеческих Fc-областей может придавать активность ADCC in vitro и противоопухолевую активность in vivo, сравнимую с его полностью мышиным родительским mAb (23), предполагает, что мышиные Fcγ-рецепторы могут иметь неразборчивость в связывании IgG от других видов, аналогичная той, о которой сообщалось для мышиного рецептора FcRn (24).

Было обнаружено, что небольшое количество mAb против EBOV защищает от смертельных исходов у мышей (2) или морских свинок (25). Прогнозируемость этих моделей для защиты приматов в настоящее время неизвестна; человеческое mAb KZ-52 защищало морских свинок, но не защищало нечеловеческих приматов (NHPs; исх.26). Точно так же нейтрализующие поликлональные антитела также не смогли защитить NHP (27). Однако недавно сообщалось о защите с помощью поликлональных антител против другого филовируса, марбургского (John Dye et al; Конференция по науке и технологиям химической и биологической защиты, 15-19 ноября 2010 г., Орландо, Флорида), предполагая, что при правильной специфичности , защита от EBOV должна быть достижимой. Исследования NHP помогут определить потенциал h-13F6 в качестве иммунопротектора вируса EBOV для использования человеком.

Итак, мы сосредоточили внимание на роли гликозилирования в разработке иммунопротектора для вируса Эбола. Мы сконструировали растения для получения mAb против EBOV с высокогомогенным профилем гликозилирования N (h-13F6 _ΔXF ), несущих двухантенарные N -гликаны с концевыми N -ацетилглюкозамином на обеих ветвях (GnGn) и без потенциально иммуногенная, специфичная для растений β1,2-ксилоза и основная α1,3-фукоза. Результирующий профиль гликозилирования значительно более однороден, чем обычно наблюдается в культуре клеток млекопитающих (рис.1). Большая однородность позволяет более точно сравнивать роль, которую специфические гликаны играют в функциональности mAb. Системы экспрессии, которые продуцируют рекомбинантные mAb из клеток млекопитающих, обычно представляют собой гетерогенные смеси гликоформ (28). Хотя впервые было описано более 20 лет назад у трансгенного Nicotiana (29), только в течение последних 4–5 лет быстрое и высокопродуктивное производство mAb в растениях стало обычным явлением (13, 30). Производство на заводах предлагает потенциал для снижения стоимости товаров в промышленных масштабах и очень очевидную экономию затрат на ранних этапах производства cGMP (31, 32).Исторически сложившаяся проблема с производством терапевтических препаратов для растений была сосредоточена на потенциале специфических для растений сахаров быть иммуногенными и изменять фармакокинетику лекарств. Однако с разработкой мутантов N. benthamiana с гликозилированием по человеческому типу (14) эти опасения были резко уменьшены, если не устранены. Недавние исследования также показали, что растения способны продуцировать mAb, несущие N -гликаны с терминальной галактозой (15) и сиаловой кислотой (33), гликаны, важные для mAb, когда Fc-опосредованная комплементарная или противовоспалительная активность, соответственно, являются важными механизмами. действия.

Материалы и методы

N. benthamiana Векторы экспрессии.

Последовательность 13F6 (номера доступа 2QHR_H и 2QHR_L) была использована Biovation (Эдинбург, Шотландия) для создания вариабельных областей h-13F6 (номер доступа TBD — последовательность, представленная в GenBank 7-11-11) с помощью запатентованной пептидной нити. программное обеспечение на платной основе. Деиммунизированные (3) вариабельные области тяжелой и легкой цепи мыши h-13F6, соединенные с человеческим IgG ₁ , и константные области лямбда-цепи были оптимизированы по кодонам для экспрессии в N.Бентамиана . Агликозилированный вариант был разработан путем мутации сайта константной области тяжелой цепи N -гликозилирования (N297A). Гены были синтезированы (GeneArt) и затем клонированы в векторы экспрессии растений (TMV и PVX) (Icon Genetics) с последующей трансформацией в штамм A. tumefaciens ICF320 (30).

Производство h-13F6

_ΔXF и h-13F6 _agly в ΔXTFT N. benthamiana .

Для временной экспрессии h-13F6 в planta мы использовали процедуру «магнифекции» [Icon Genetics, Halle (Saale), Германия], как описано (34), с небольшими модификациями.Растения, выращенные в течение 4 недель в закрытом помещении для выращивания при температуре 20–23 ° C, использовали для вакуумной инфильтрации. Равные объемы выращенных в течение ночи культур Agrobacterium смешивали в буфере для инфильтрации (10 мМ Mes, pH 5,5 / 10 мМ MgSO ₄ ), в результате чего получали разведение 1: 1000 для каждой отдельной культуры. Раствор для инфильтрации переносили в специальную вакуумную камеру объемом 20 л (Kentucky Bioprocessing, Owensboro, KY). Надземные части целых растений погружали вверх дном в бактериальный / буферный раствор.Создавали вакуум 0,5 бар в течение 2 мин. После инфильтрации растения возвращали в камеру выращивания в стандартных условиях выращивания. Через восемь дней после инфильтрации ткань листа экстрагировали в соковыжималке (Green Star, модель GS-1000), используя 25 мл охлажденного буфера для экстракции (100 мМ Трис / 40 мМ аскорбиновая кислота / 1 мМ ЭДТА) на 100 г зеленого листа. салфетка. Экстракт растительного происхождения осветляли, понижая pH экстракта до pH 4,8 с помощью 1 M фосфорной кислоты, затем повторно доводя его до pH 7,5 с помощью 2 M трис-основания, чтобы перевести в нерастворимую форму растительные остатки, с последующим центрифугированием при 16000 × g в течение 30 мин. .Супернатант переносили и повторно центрифугировали при 16000 × g в течение дополнительных 30 мин. Осветленный экстракт фильтровали через 0,2 мкм перед концентрированием с помощью системы фильтрации с минимальным тангенциальным потоком (Pall), затем снова фильтровали 0,2 мкм перед загрузкой в ​​5 мл колонки HiTrap MabSelect SuRe (GE Healthcare) Protein A со скоростью 2 мл / мин. Затем колонку промывали рабочим буфером (50 мМ Hepes / 100 мМ NaCl, pH 7,5) и элюировали 0,1 М уксусной кислотой (pH 3,0). Полученный элюат нейтрализовали до pH 7, используя 2 M Tris (pH 8.0) и с добавлением Твин 80 (0,01%). Затем раствор mAb полировали с помощью Q-фильтрации (мембрана Mustang Acrodisc Q; Pall), разделяли на аликвоты и хранили при -80 ° C до использования.

Производство h-13F6

_CHO .

Стабильная клеточная линия СНО, экспрессирующая mAb h-13F6 EBOV, культивировалась в среде CD OptiCHO (Invitrogen) и ежедневно добавлялась добавкой биореактора питания CHO (Sigma). Культуру CHO выращивали в суспензии с использованием шейкера 37 ° C с ежедневным ручным контролем уровня глюкозы и корректировкой стерильного 45% раствора глюкозы (Mediatech).Культивирование прекращали, когда жизнеспособность клеток достигала менее 20%. Кондиционированную среду собирали и осветляли центрифугированием. Осветленную кондиционированную среду 13F6 _CHO фильтровали (0,2 мкм) перед концентрированием с помощью системы фильтрации с минимальным тангенциальным потоком (Pall). Кондиционированную среду концентрировали в 10 раз, фильтровали (0,2 мкм) и наносили на 1 мл колонки HiTrap MabSelect SuRe (GE Healthcare) Protein A со скоростью 0,5 мл / мин. Затем колонку промывали рабочим буфером 1 × PBS и элюировали 0.1 М уксусная кислота (pH 3,0). Полученный элюат нейтрализовали до pH 7, используя 2 M Tris (pH 8,0), и заменили буфер на 1 × PBS с 0,01% Tween 80, используя Amicon Ultra (Millipore). Затем раствор mAb полировали с помощью Q-фильтрации (Sartobind Q; Sartorius), разделяли на аликвоты и хранили при -80 ° C до использования.

Все очищенные варианты mAb 13F6 (CHO, ΔXF, agly) были полностью собраны, как определено с помощью SDS / PAGE, и имели менее 5% агрегатов, как определено с помощью HPLC-SEC.

N -Гликановый анализ.

N -гликановый анализ проводили методом жидкостной хроматографии с электрораспылением и ионизацией-масс-спектрометрией (LC-ESI-MS) триптических гликопептидов (35). Короче говоря, полосы, которые соответствуют тяжелой цепи в SDS / PAGE, окрашенных Кумасси, вырезали, белки S алкилировали, расщепляли трипсином и затем анализировали с помощью LC-ESI-MS (35).

Анализ биокор.

Рекомбинантные человеческие FcγRI и FcγRIII (Sino Biological, Китай) были иммобилизованы на поверхности чипов CM5 (GE Healthcare) с использованием набора для связывания аминов с целевым уровнем захвата 1000 RU.Каждое mAb (разведенное в буфере HBS-EP +; GE Healthcare) затем пропускали через чип в пяти различных концентрациях (с максимальной концентрацией R max между 30 и 80 RU), и были выполнены кинетические анализы с использованием программного обеспечения BIAEvaluation ( 1: 1 подходит). Быстрые скорости потока и контроли (включая проточную кювету без рецептора и иммобилизованный рецептор с потоком только буфера) были выполнены для предотвращения получения данных, ограниченных массопереносом. Данные о связывании с HIS-меченными мышиными рецепторами Fcγ (Sino Biological) были получены с использованием сенсорного чипа NTA.Вкратце, на чипе было захвачено ~ 1000 RU рецептора с последующим потоком mAb h-13F6 в фиксированной концентрации (5 мкг / мл).

ИФА связывания C1q.

Связывание человеческого C1q (Calbiochem, Сан-Диего, Калифорния) с IgG mAb оценивали, как описано (17). 96-луночные планшеты Costar с высоким связыванием (Кембридж, Массачусетс) покрывали в течение ночи при 4 ° C различными концентрациями mAb, разведенных в буфере для покрытия (PBS). После блокирования (PBS / 2% BSA) в течение 1 часа добавляли 2 мкг / мл человеческого C1q. Связывание C1q с mAb детектировали с использованием разведения 1/1000 козьего поликлонального антитела против C1q человека (Calbiochem) с последующим разведением 1/5000 кроличьего анти-козьего (адсорбированного человека) антитела, конъюгированного с HRP (Southern Biotech). , Бирмингем, Алабама).Планшеты были разработаны с TMB (KPL, Gaithersburg, MD). Реакцию останавливали 2,5 N H ₂ SO ₄ и измеряли оптическую плотность при 450 нм.

Вирусы, животные и инфекции.

Вирус EBOV, адаптированный к мышам, был получен от Майка Брея (36). Самок мышей C57BL / 6 или BALB / c (в возрасте 5-8 недель) получали из Национального института рака (Фредерик, Мэриленд) и содержали в определенных условиях, свободных от патогенов. mAb были доставлены i.p. инъекция за 1 день до заражения.Для инфицирования мышей инокулировали внутрибрюшинно. с 1000 БОЕ (30 000 LD ₅₀ ) адаптированного к мыши вируса EBOV в лаборатории с уровнем биобезопасности 4 (BSL-4). За животными наблюдали по крайней мере ежедневно в течение 28 дней после контакта с вирусом. Исследования проводились в соответствии с Законом о благополучии животных и другими федеральными законами и постановлениями, касающимися животных и экспериментов с животными, и придерживались принципов, изложенных в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных, Национальный исследовательский совет (1996).Учреждение, где проводилось это исследование, полностью аккредитовано Ассоциацией по оценке и аккредитации Международной организации по уходу за лабораторными животными.

Статистика.

Кривые выживаемости анализировали с помощью логрангового критерия (Мантела – Кокса). Сродство сравнивали с непарным тестом t (двусторонний). Модели логистической регрессии использовались для получения точечной оценки и доверительного интервала для ED ₅₀ , где зависимой переменной был логит вероятности выживания, а независимой переменной был логарифм дозы.ED ₅₀ был оценен с использованием отрицательного отношения точки пересечения модели к наклону (оценка регрессии логарифмической дозы). SE оцененного ED ₅₀ был рассчитан с использованием ковариационной матрицы дисперсии модели оцененного пересечения и наклона. Относительная эффективность, величина, определяемая как отношение двух ED ₅₀ и ее 95% доверительный интервал, оценивалась с использованием моделей логистической регрессии с двумя точками пересечения и общим наклоном (для двух сравниваемых анализов) в предположении параллельных линий.Оценка относительной активности представляла собой отношение разности двух точек пересечения к оценке наклона. Теорема Филлера (37) была использована для получения 95% доверительного интервала для оценки относительной эффективности. Все анализы были выполнены с использованием программного обеспечения Prism (GraphPad) и программного обеспечения SAS (38).

Благодарности

Мы благодарим доктора Юрия Глеба за предоставление доступа к системе экспрессии magnICON, доктора Огняна Бохорова за комментарии к рукописи и докторов наук. Фридриху Альтманну и Йоханнесу Штадлманну за анализы гликанов.Эта работа была поддержана грантами Национального института аллергии и инфекционных заболеваний AI61270 и AI 72915 и грантом Министерства обороны DAMD 17-02-2-0015, а также частично поддержана грантом Агентства по снижению угроз обороны США № 4.10007-08-RD-B.

Сноски

• Вклад авторов: L.Z., M.P., A.H., H.S., K.J.W. и G.G.O. спланированное исследование; L.Z., J.P., C.S., N.B. и D.K. проведенное исследование; H.S. внесены новые реагенты / аналитические инструменты; L.Z., J.P., C.S., L.N., H.С., К.Дж.У. и Г.Г.О. проанализированные данные; and L.Z., C.S., N.B., D.K., M.P., A.H., L.N., H.S., K.J.W. и G.G.O. написал газету.

• Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

• ↵ * У этой статьи для прямого представления был назначен редактор.

• Размещение данных: Последовательности, описанные в этой статье, были депонированы в базе данных GenBank (инвентарные номера JN374688 и JN374689).

Доступно бесплатно в Интернете через опцию открытого доступа PNAS.

CRISPR-Cas13, разработанный как комбинированная антивирусная и диагностическая система

Около двух третей вирусов, которые могут инфицировать людей, в том числе смертельная Эбола, Зика и грипп, имеют геном с одноцепочечной РНК, и для большинства этих типов вирусов не существует терапии, одобренной Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов. Ученые под руководством группы из Массачусетского технологического института (MIT) и Гарварда теперь сообщают о разработке технологии на основе фермента CRISPR-Cas13 под названием CARVER (ограничение вирусной экспрессии и считывания с помощью Cas13), которая может быть запрограммирован как на обнаружение, так и на уничтожение вирусов на основе РНК в клетках человека.Утверждается, что это исследование является одним из первых, в котором Cas13 или любая система CRISPR используется в качестве противовирусного средства в культивируемых клетках человека.

«Вирусные патогены человека чрезвычайно разнообразны и постоянно адаптируются к окружающей среде, даже в пределах одного вида вируса, что подчеркивает как проблему, так и потребность в гибких противовирусных платформах», — прокомментировал руководитель исследования Пардис Сабети, доктор философии, член института Института Броуда. , профессор Гарвардского университета и исследователь Медицинского института Говарда Хьюза.«Наша работа делает CARVER мощной и быстро программируемой диагностической и антивирусной технологией для широкого спектра этих вирусов». Сабети вместе с коллегами, в том числе соавторами Кэтрин Фрейе, аспирантка лаборатории Сабети Гарвардского университета, и Кэмерон Мирволд, доктор философии, постдок лаборатории Сабети, сообщили о своих открытиях в Molecular Cell в статье под названием , «Программируемое ингибирование и обнаружение РНК-вирусов с использованием Cas13».

Технологии

CRISPR-Cas «произвели революцию» в нашей способности точно редактировать гены и определять экспрессию генов », — заявили авторы.В природе системы CRISPR превратились в механизм защиты бактерий от вторжения бактериофагов и других чужеродных нуклеиновых кислот. «Это говорит о том, что эффекторы CRISPR могут быть перепрофилированы для защиты клеток млекопитающих от ДНК- и РНК-вирусов», — продолжили исследователи. Ученые добились прогресса в технологиях на основе CRISPR, которые используют Cas9 для подавления репликации двухцепочечных ДНК-вирусов, но большинство вирусов, инфицирующих людей, имеют геномы одноцепочечной РНК, на которые нельзя эффективно воздействовать с помощью стратегий, основанных на Cas9.

Добавляя перспективу к трудностям в создании эффективных методов лечения вирусов человека и, в частности, патогенов оцРНК, авторы отметили, что, хотя за последние 50 лет было произведено 90 клинически одобренных противовирусных препаратов, они лечат всего девять вирусных заболеваний, только четыре из них. которые являются вирусами ssRNA. «Вакцины стали преобладающим методом борьбы с вирусными заболеваниями, но только 16 вирусов имеют одобренные FDA вакцины». Команда заявила, что разработка противовирусных подходов является особенно сложной задачей, поскольку «вирусные патогены человека весьма разнообразны и быстро развиваются», что подчеркивает как «проблему разработки, так и большую потребность в адаптируемых противовирусных терапевтических платформах.”

Недавно исследователи адаптировали Cas13, который естественным образом нацелен на вирусную РНК в бактериях, в качестве инструмента для вырезания и редактирования человеческой РНК, а также в качестве диагностического средства для обнаружения вирусов, бактерий или других мишеней. Фермент был хорошо изучен в клетках млекопитающих исследователями, в том числе основным членом Института Брод и соавтором Фэн Чжаном, доктором философии, и может быть направлен на нацеливание на определенные последовательности в РНК. Cas13 также относительно легко доставлять в клетки.

В своей недавно опубликованной работе исследователи объединили противовирусную активность Cas13 с его диагностическими возможностями — используя метод, называемый специфической высокочувствительной разблокировкой ферментативного репортера, или SHERLOCK — для создания единой платформы CARVER, которая в конечном итоге может быть разработана как для диагностики, так и для лечения Вирусные инфекции ssRNA, включая инфекции, вызываемые новыми и появляющимися вирусами.

Ученые сначала проверили набор из более чем 350 геномов вирусов, ассоциированных с человеком (HAV), чтобы определить последовательности вирусной РНК, которые могут быть эффективно нацелены Cas13. «ВГА определяются как вирусные виды, которые могут инфицировать людей, или их близких родственников, которые заражают людей», — пояснили авторы. «В базе данных NCBI по соседству с геномом насчитывается 396 видов вирусов оцРНК, ассоциированных с человеческими, по крайней мере 20 из которых являются патогенами человека высокого риска». Для своего поиска команда в первую очередь искала цели, которые с наименьшей вероятностью будут мутировать, и, скорее всего, при вырезании, чтобы отключить вирус.

«Теоретически вы можете запрограммировать Cas13 для атаки практически на любую часть вируса», — пояснил Мирвольд. «Но существует огромное разнообразие внутри и между видами, и большая часть генома быстро изменяется по мере развития вируса. Если вы не будете осторожны, вы можете преследовать цель, которая в конечном итоге не даст никакого эффекта ».

Исследователи с помощью вычислений определили тысячи потенциальных сайтов в сотнях вирусных видов, которые могут представлять собой эффективные мишени для Cas13. Вооружившись этим списком потенциальных вирусных РНК-мишеней, они сконструировали управляющую РНК фермента Cas13, чтобы полученная система могла найти и разрезать любую из выбранных последовательностей нуклеиновых кислот-мишеней.

Затем они экспериментально проверили активность Cas13 в клетках человека, инфицированных одним из трех различных вирусов на основе РНК: вирусом лимфоцитарного хориоменингита (LCMV), вирусом гриппа A (IAV) и вирусом везикулярного стоматита (VSV). Три вируса были выбраны в качестве «оптимальных тестовых примеров», по крайней мере, отчасти потому, что они демонстрируют отличное разнообразие последовательностей и стратегии репликации. «LCMV — это модельная вирусная система для изучения маммаренавирусов, многие из которых вызывают геморрагическую лихорадку у людей, включая вирус лихорадки Ласса… Точно так же IAV — очень разнообразный вирусный патоген с высокой сезонной распространенностью и пандемическим потенциалом.Быстрая эволюция IAV и склонность к рекомбинации являются препятствиями для разработки как противовирусных препаратов, так и вакцин и легко способствуют возникновению лекарственной устойчивости … Наконец, мы подчеркиваем полезность Cas13 против дополнительного вируса ssRNA, VSV, что может позволить провести высокопроизводительные исследования crRNA. нацеленные свойства, потому что продуктивная инфекция VSV приводит к гибели клеток ».

Команда впервые ввела в клетки ген Cas13 и сконструированную направляющую РНК. Затем, через 24 часа, они подвергли клетки воздействию одного из трех вирусов.Результаты показали, что еще через 24 часа ферменты Cas13 снизили уровень вирусной РНК в культурах клеток до 40 раз. Обнадеживает то, что дальнейшие эксперименты показали, что через восемь часов после воздействия вируса Cas13 снизил инфекционность вируса гриппа более чем в 300 раз.

Чтобы добавить диагностический компонент, исследователи затем включили в систему технологию обнаружения нуклеиновых кислот на основе Cas13, SHERLOCK. Полученная в результате комбинированная диагностическая и противовирусная система CARVER может быстро измерить оставшиеся уровни вирусной РНК в образце.«В отличие от других подходов, основанных на нуклеиновых кислотах, и что весьма примечательно, Cas13 может применяться как в контексте обнаружения вирусов, так и в контексте нокдауна, создавая потенциал для сквозной платформы для диагностики и лечения инфекционных заболеваний», — пояснили авторы. «… Мы разработали CARVER как платформу для измерения уровней вирусной РНК после нацеливания на Cas13 в реальном времени с использованием технологии обнаружения нуклеиновых кислот на основе Cas13 SHERLOCK».

Исследователи говорят, что их исследования демонстрируют, как Cas13 может эффективно воздействовать на несколько различных вирусов ssRNA млекопитающих.«С помощью CARVER эффектор Cas13 CRISPR-Cas может нацеливаться на несколько вирусов млекопитающих, а также измерять эффекты нацеливания и вирусный ответ. Такая технологическая гибкость беспрецедентна для одного белка и подчеркивает мощь и перспективность программируемых нуклеаз, таких как Cas13 ».

«Мы рассматриваем Cas13 как исследовательский инструмент для изучения многих аспектов вирусной биологии в клетках человека», — заявил Фрайе. «Это также потенциально может быть клиническим инструментом, где эти системы могут использоваться для диагностики образца, лечения вирусной инфекции и измерения эффективности лечения — все с возможностью быстрой адаптации CARVER для борьбы с новыми или лекарственно-устойчивыми.